我们在用血液样本进行基因检测的时候，有时候血液会出现溶血等质量问题，这严重影响了样本的正常检测，给我们的工作带来了极大困扰。那么溶血会产生什么影响？是什么因素导致溶血的？怎样才能避免溶血事件的发生呢？
溶血的影响
红细胞破裂，血红蛋白逸出称为红细胞溶解，简称溶血，它可由多种理化因素和毒素引起。严重溶血下，标本不可用，血红蛋白及其代谢产物可能抑制Taq酶活性，使PCR扩增效率明显降低。
图14号、5号样本属于溶血样本，需要重新采血
溶血的原因
1、患者本身因素。若患者有自身溶血性贫血、高胆红素血症等疾病时，抽出的血液可能已为溶血状态。
2、穿刺困难。患者由于某些原因导致血流不畅或严重脱水、休克、恶病质等造成末梢循环差，静脉充盈不良，均可导致穿刺困难，采血时间延长，部分血液凝固，细胞机械破坏,造成溶血。
3、操作不当。采血者在采血部位消毒液未干的情况下即进行穿刺，或采血时将止血带扎得过紧、时间太长，或在采血时定位或进针不准,使得针尖在静脉中反复进出，这些不当操作均可造成标本溶血。将血液注入试管时速度过快或混匀血液与抗凝剂的过程中动作过猛，造成红细胞撞击,导致红细胞破裂。
4、抽血器具不合格。临床上所用的抽血器具一般为一次性塑料制品，不合格的塑料制品会因聚合不完全而具有毒性引起血标本溶血。若玻璃试管不干燥或不清洁也会造成溶血。抗凝试管中抗凝剂偏少也可导致溶血。
5、存放、运送和分离不当。血标本采集好后未马上送检，放置时间过长，造成溶血。运送途中剧烈振荡致使红细胞撞击破裂而溶血。离心速度太快,也可导致溶血。
那如何才能避免溶血呢？科学规范的操作是非常必要的。
血液采集、储存、运输
1.采血管
采血管常见有两类：
（1）cfDNA专用常温采血管：特指StreckCell-FreeDNABCT?BloodCollectionTubes(10ml)，后文中用StreckcfDNA常温采血管或Streck管指代。
（2）EDTA管
禁用肝素抗凝管：由于肝素使得DNA抽提得率降低并在DNA提取过程中难以去除，肝素也会导致PCR效率降低，因此cfDNA检测血液采集禁用肝素抗凝管。
2.使用StreckcfDNA常温采血管采集、储存、运输血液
（1）血液采集操作流程：
1).依据CLSIH3-A6指南或当地指南采集静脉血
防止回流:由于Streck管含有化学添加物，必须避免血液回流。为防止回流，应采取以下措施：
a.在采血过程中保持患者胳膊处于下方
b.保持采血管和管塞处于上方，防止采血管管内容物触及管塞或针的末端
c.在血液开始流入采血管时立即或在两分钟内释放止血带
2).遵循CLSIH3-A6或当地指南或实验室准则采血
3).采集10ml血液，完全填满采血管
4).从适配器上取下采血管，握住采血管，立即轻柔颠倒10次。颠倒不充分或颠倒不及时均可能导致提取结果欠佳。一次完整颠倒包含手腕完全旋转度再折回，如下图所示：
图2采血管颠倒混匀
（2）血液储存及运输
为保证后续血浆分离及cfDNA提取质量，Streck管禁止冷藏/冷冻血液标本，建议常温保存及运输(6-36℃)至指定实验室。从采血至运输到实验室检测的时间间隔不超过3天。
3.使用EDTA管(10ml)采集、储存、运输血液
（1）遵循标准静脉采血程序采集10ml血液,轻柔颠倒6-8次以混匀标本，切勿摇晃.
（2）禁止冷冻血液标本，建议4℃保存。
（3）血液应尽快离心处理，1小时内处理最佳，至多不超过2小时。本操作流程包括两步离心，以防止最终样本中出现基因组DNA/RNA污染。
4.采血量的要求
（1）不同平台对血浆量的要求量不一样，一般要求采用10mL采血管，10ml血液大约能分离出4-5ml血浆。
（2）对同一患者，血浆量越多，所提取的DNA量就越多，其中含有的cfDNA量也就越高，对检测越有利
图3对同一患者，血浆量越多，所提取的DNA量就越多，其中含有的cfDNA量也就越高(Sherwoodetal.PLoSONE)
5.血液采集后送到实验室检测所能允许的最大时间间隔
（1）两小时内处理标本能最大程度避免血细胞破裂而造成基因组DNA(gDNA)污染
图4A.2h内处理标本，不论采用EDTA管还是cfDNABCT管，DNA浓度均无显著差异;B.72h内处理标本，不论EDTA管还是cfDNABCT管，DNA浓度较2h时均显著提高，即gDNA污染增加(Sherwoodetal.PLoSONE)
（2）不能在两小时内处理标本时，cfDNABCT(Streck)管优于EDTA管
图5左图，2h内处理标本，EDTA管和cfDNABCT管无显著差异;右图，72h内处理标本时，EDTA管DNA浓度显著高于cfDNABCT管，即EDTA管中gDNA污染显著高于cfDNABCT管(SherwoodetalPLoSONE)
（3）不同采血管所能允许的最大时间间隔
1）Streck管：从采血至运输到实验室检测的时间间隔不超过3天。
2）EDTA管：医院离心，分离出血浆之后干冰运输至实验室。从采血至分离血浆至多不能超过2小时。
6.血液采集后送往实验室检测前的保存方式和条件
（1）Streck管：血液应该在室温（6℃-36℃）储存，在室温（6℃-36℃）环境下运输至实验室。
（2）EDTA管：从采血至运输到中心实验室离心处理至多不能超过2h，离心前临时保存应暂放于2~8℃冷藏。分离血浆后，应立即竖直放置，冷冻血浆，-80℃冷冻最佳（或-20℃冷冻直至干冰运输）。
鼎晶生物已建立全流程质控体系，最大限度保证患者样本质量安全，为患者提供最高效、最精确的检测服务！
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