【学海无涯】犬本身免疫性溶血性贫血的诊断
本身免疫性溶血性贫血（autoimmunehemolyticanemiaorAIHA)是由于犬体内产生自身抗体，与本身红细胞产生免疫反应，使红细胞大量破坏，引发的一种贫血性疾病[1]。AIHA的病因和病发机制迄今仍未完全阐明。目前对未能找到引发因素的称为特发性或原发性AIHA，对有明确病因者称为继发性AIHA[2]。AIHA病发呈上升趋势，近两年笔者遇到5个AIHA病例。资料介绍确诊该病要做库姆斯实验，但兔抗犬球蛋白血清不容易取得，此实验展开很有难度。笔者用本身血清与本身红细胞反应诊断该病，简单易行，未见他人报导。现以最近接诊1病例为例，报告以下。
1病史及临床症状
松狮犬，♂，7岁，24kg，2月5号来我院救治。主诉：2月2号病发，精神沉郁，全身无力，2月3号小便呈浓茶色，4号呈酱油色，绝食两天，近一个月来饮食、环境等均未改变，家里还有17岁杂交母犬一切正常。临床检查：T：38.6℃、P：次/min、R：65次/min，可视黏膜、皮肤苍白发黄，张口呼吸快速浅表，四肢无力。
2实验室检查
2.1血液眼观检查取抗凝血3滴，平铺在洁净载玻片上，于明亮处可见很多红色颗粒。
2.2血常规检查
日期
WBC
（×/L）
RBC
（×/L）
HGB（g/L）
HCT
MCV
（fL）
MCH
（Pg）
MCHC
（g/L）
PLT
（×/L）
5/2
66.7
1.47
25
0.
84.4
17.0
53
6/2
57.4
1.65
27
0.
87.3
16.4
8/2
42.8
1.44
42
0.
.6
29.1
32
11/2
62.7
1.72
49
0.
95.5
28.5
73
2.3血清生化检查ALT：55U/L，AST：35U/L，ALP：62U/L，ALB：25.3，TP：76.4，DBI：12.4μmol/L，TBI：31.1μmol/L，γ-GT：3.6U/L，AMYL：U/L，BUN：7.5mmol/L，CREA：83μmol/L，Ca：2.3mmol/L，P：1.97mmol/L，CK：65U/L，LDH：U/L，GLU：6.1mmol/L，CHOL：6.3mmol/L，TG：0.65mmol/L。
2.4红细胞形态学检查鲜血悬滴镜检可见大量红细胞聚集成团。瑞氏染色镜检可见红细胞大小不均，大量球形红细胞，大量破裂红细胞，大量红细胞会聚成团，少许有核红细胞。煌焦油蓝染色镜检可见大量织红细胞，约占成熟红细胞的45%。
2.5本身红细胞与本身血清反应实验
2.5.1抽血抽患犬静脉血液5ml。
2.5.2分离血清将2ml血液注入一次性试管中静置并分离出血清。
2.5.3分离少白细胞红细胞将3ml血液注入加有抗凝剂的一次性试管中，混匀，离心（条件设置：转/min，10min,温度4℃[3]），将红细胞与血浆交界处的白膜层与血浆一起去除，得到少白细胞红细胞。
2.5.4过滤并洗涤红细胞将少白细胞红细胞放入另外一一次性试管中，加生理盐水5ml，混匀，用一次性袋式输液器的式药液过滤器过滤，离心，去上清液，再加生理盐水5ml稀释混匀，再过滤，如此往复5次。最后一次去上清液后加1ml生理盐水混匀，取得单个洗涤红细胞液。取得的洗涤红细胞液手工计数为2.55×/L。
2.5.5做对比组取我院健康献血犬血液5ml，按上述方法分别取得血清和洗涤红细胞液。将洗涤红细胞液用生理盐水再稀释，稀释后的洗涤红细胞液红细胞手工计数为2.80×/L。
2.5.6本身红细胞与本身血清反应实验取洁净载玻片4片，分别标注患1、患2、健1、健2。患1、健1分别滴患犬、健康犬的血清、洗涤红细胞液各ul并混匀，患2、健2分别滴患犬、健康犬的血清50ul、洗涤红细胞液ul并混匀。并将4个载玻片放于38.5度无菌培养箱中静置并计时。每5分钟镜检一次。
2.5.7实验结果
时间
患1
患2
健1
健2
min
－
－
－
－
35min
＋－
－
－
－
40min
＋
＋－
－
－
45min
＋
＋
－
－
50min
＋＋
＋
－
－
55min
＋＋＋
＋＋
－
－
60min
＋＋＋
＋＋＋
－
－
（注：按以下标准记录反应强度：－：红细胞均匀分布无凝集；+：25％红细胞凝集；++：50％红细胞凝集；+++：75%红细胞产生凝集。）
患犬无可查病发诱因；血常规显示严重贫血；镜检织红细胞、有核红细胞比例增高，红细胞再生良好；镜检有破裂红细胞、红细胞聚集成团，生化总胆红素、间接胆红素升高，临床症状茶色、酱油色尿，红细胞出现溶血；本身血清、红细胞出现凝集现象；其它脏器生化指标正常，其他临床症状正常。综合以上确诊为犬原发性本身免疫性溶血性贫血。该犬经医治无效，于15日晚死亡。
3讨论
3.1该病诊断要明确以下问题：有没有贫血，甚么性质的贫血，是不是存在自身抗体与本身红细胞产生免疫反应。
3.2笔者遇到的几个病例，血液中均有集结成团的红细胞，实验时，一定要过滤血液并取得单个红细胞溶液。一次性袋式输液器的式药液过滤器，孔径为15um±2um（红细胞直径为6..7um[4]），用它过滤较为理想。
3.3用过滤、洗涤后的红细胞与本身血清反应诊断本身免疫性溶血性贫血，笔者还没看到相干报导。该实验简单易行，随时可以做，医治进程中，还可及时了解血清与红细胞凝集加重还是减轻，更能准确的对疾病的预后做出判断。
3.4对有自身抗体与本身红细胞明显凝集时，用上实验简单方便，对有自身抗体但不产生凝集或凝集不强时，上实验敏感性低乃至检验结果阴性，需要做库姆斯实验。
3.5库姆斯实验要用兔抗犬球蛋白血清，但兔抗犬球蛋白血清不容易取得，该实验很受限制。即便可以做该实验，对有红细胞出现凝集的血液也要过滤，如果不过滤，就没法判断凝集颗粒是血液中的还是实验中构成的。笔者所查到的有关库姆斯实验的资料都没有介绍要过滤及过滤的具体方法。
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