张茜1，王萌1，李淑兰2，赖惠英1，郭健1
（1.医院检验科；2.医院血液科）
摘要：目的探讨触珠蛋白（HP）对溶血性贫血患者的鉴别诊断价值，研究影响HP诊断准确性的因素。方法分别测定溶血性贫血组、其它类型贫血组、肝硬化组和急性时相反应组患者血清HP浓度，并应用受试者工作特征曲线（ROC曲线）评价HP对溶血性贫血的诊断价值。结果溶血性贫血组HP中位数水平显著低于其它各组（P＜0.01），HP的ROC曲线下面积（AUC）等于0.（95％CI：0.～0.），HP诊断溶血性贫血的临床准确性较高，二分类Logistic回归分析发现，血清HP和间接胆红素（IBIL）是溶血性贫血诊断的重要指标，溶血部位及伴发急性时相反应都不会影响HP对溶血性贫血的诊断。结论 HP是诊断溶血性贫血的一个敏感的诊断指标，仅肝硬化等肝脏严重损伤疾病影响HP的诊断。
关键词：触珠蛋白；溶血性贫血
溶血性贫血是红细胞寿命缩短、破坏增加，骨髓造血功能代偿不足，难以补偿红细胞耗损所发生的一类贫血。HP是一种α2糖蛋白，其主要功能是与游离血红蛋白（Hb）结合成HPHb复合体。当体内红细胞大量破坏时，HP可减少Hb及铁的流失，减轻肾脏损伤。同时，游离Hb是一种氧化剂，HP通过与Hb结合，抑制Hb与一氧化氮的相互作用，保护内皮细胞的舒张功能[1]。本文通过测定溶血性贫血组等患者血清HP浓度，探讨HP在溶血性贫血诊断中的作用，同时分析溶血部位、伴发急性时相反应是否影标记免疫分析与临床 年12月第21卷第6期响HP的诊断。
对象与方法
1对象
选取医院及医院年6月至11月例患者，其中溶血性贫血患者55例（表1），其它类型贫血患者60例（表2），肝硬化患者30例，急性时相反应患者32例。溶血性贫血患者诊断符合《血液病诊断及疗效标准》[2]。肝硬化患者诊断符合《病毒性肝炎防治方案》[3]。急性时相反应组患者C反应蛋白（CRP）均大于0.8mg／dL。
2方法
2.1 仪器与试剂 AU全自动生化分析仪购自日本奥林巴斯公司；IMMAGE双光径免疫浊度分析仪购自美国贝克曼库尔特公司；ADVIA血细胞分析仪购自德国拜耳公司。HP以中生北控生物科技股份有限公司试剂检测；直接胆红素和总胆红素以日本和光纯药工业株式会社试剂检测；乳酸脱氢酶（LDH）测定试剂盒购自日本奥林巴斯公司；CRP以美国贝克曼库尔特公司试剂检测；RET（网织红细胞计数）以德国拜耳公司试剂检测。间接胆红素（IBIL）为总胆红素减去直接胆红素的数值。
2.2 标本采集与处理抽取患者空腹静脉血10mL，分别放入普通血清管和EDTA抗凝管中。普通血清管静置30min，以r／min离心6min分离血清，用于检测。
3统计学分析
应用Medcalc9.4.2.0软件进行统计学分析。HP、LDH、IBIL及RET数据均为偏态分布资料，用中位数（X25％，X75％）表示；两个独立样本比较采用Mann-WhitneyU检验，α为0.05；多个独立样本比较采用Kruskal-WallisH检验，α为0.05；多个独立样本两两比较采用Mann-WhitneyU检验，本文校正α为0.01；HP与CRP的相关性分析采用Pearson相关性检验；通过ROC分析，计算HP的灵敏度、特异度、Youden指数、阳性似然比、阴性似然比和AUC。二分类Logistic回归分析性别、年龄、HP、IBIL、LDH和RET中影响溶血性贫血诊断的独立因素。
结果
1各组基本特征的比较
四组间的性别构成无差异（P＞0.05）。溶血性贫血组的平均年龄与其他三组相比较有差异（P＜0.01），溶血性贫血组与其它类型贫血组间的LDH、
IBIL、RET有差异（P＜0.05），见表3。
2各组HP浓度的比较
溶血性贫血组、其他类型贫血组、肝硬化组和急性时相反应组的HP浓度（g／L）分别为0.05（0.04，0.18）、1.06（0.62，1.54）、0.33（0.06，0.89）、2.01（1.41，2.56）。对四组HP浓度水平进行两两比较的秩和检验，P值均小于0.01，所以任意两组HP浓度的差异均有统计学意义。溶血性贫血组HP浓度显著低于其他组，急性时相反应组HP浓度显著高于其他组。
3 HP诊断溶血性贫血的临床准确性
以溶血性贫血组为病例组，以其它类型贫血组为对照组，研究HP诊断溶血性贫血的临床准确性。HP的浓度等于0.27g／L时，Youden指数[4]最大，等于82.8。当HP的cutoff值选为0.27g／L时，其灵敏度等于94.5％，特异度等于88.3％，阳性似然比等于8.1，阴性似然比等于0.1。HP的AUC等于0.（95％CI：0.～0.，P＜0.05）。
4 判断溶血部位是否影响HP对溶血性贫血的诊断
在溶血性贫血组中，发生于血管内和血管外溶血的患者例数分别为18和37。经两独立样本比较的Mann-WhitneyU检验，发生于血管内和血管外溶血的HP浓度的差异无统计学意义（U＝.，P＝0.）。因此可以认为溶血部位不影响HP对溶血性贫血的诊断。
5 判断伴发急性炎症反应是否影响HP对溶血性贫血的诊断
CRP试验作为一个极灵敏的急性时相反应蛋白，当患者处于急性时相反应时，CRP会超过0.8mg／dL。在溶血性贫血组中，CRP大于及小于0.8mg／dL的患者例数分别为10和45。经两独立样本比较的MannWhitneyU检验，CRP大于及小于0.8mg／dL的患者HP浓度的差异无统计学意义（U＝.，P＝0.）。因此可以推断患者是否伴发急性时相反应不影响HP对溶血性贫血的诊断。并且本组患者的HP与CRP浓度无相关关系（r＝0.，P＝0.）。
6 二分类Logistic回归分析
以性别、年龄、HP、IBIL、LDH和RET为自变量，以是否诊断为溶血性贫血为因变量，引入Logistic回归分析，采用逐步前进法（α入＝0.05，α出＝0.10），最后筛选出的变量为HP（P＝0.）和IBIL（P＝0.）。回归方程为P＝ex／（ex＋1）；x＝－4.－7.XHP＋0.XIBIL（P为HP和IBIL联合推测溶血性贫血发生的概率；（XHP是以g／L为单位、XIBIL是以μmol／L为单位的数值）。
在55例溶血性贫血患者中，用此方程预测有52例患者是溶血性贫血患者，正确率为94.5％；在60例其它类型贫血患者中，用此方程预测有57例患者不是溶血性贫血患者，正确率为95.0％；总正确率为94.8％。
讨 论
HP是一种α2酸性糖蛋白，广泛存在于人类和哺乳动物的血液及其它体液中。当体内发生溶血时，血清HP大量被消耗，HP浓度降低。HP是一种肝脏合成的血浆蛋白，其血清浓度降低常发生于营养不良或慢性肝脏疾病患者，慢性肝炎时血清HP中度降低，肝硬化时HP重度降低。HP同时是一种急性时相反应蛋白，其浓度升高常发生于炎症、感染及恶性肿瘤等急性炎症性疾病。本实验结果显示，HP中位数水平在溶血性贫血组最低，在急性时相反应组最高，溶血性贫血组和肝硬化组的HP浓度低于其它类型贫血组。实验结果与以上观点相吻合。
溶血性贫血是由于红细胞破坏过多、过速，超过造血补偿能力时所发生的一种贫血。当溶血性贫血发生时，大量Hb进入血循环，游离Hb与HP结合为HP-Hb复合体，此复合物半衰期很短（平均9～30min），迅速被单核巨噬细胞系统清除，致使大量HP被消耗，HP浓度下降。血清HP水平的检测是了解红细胞是否被破坏的最直观方法。在本实验中，HP的ROC曲线下面积大于0.9，表明HP诊断溶血性贫血的临床准确性较高。并且本实验是以其它类型的贫血患者为对照组，并非以健康人群为对照，由此说明HP对诊断溶血性贫血有一定的鉴别诊断价值。若血清HP浓度小于0.27g／L则可怀疑为溶血性贫血。有文献还指出，HP还可用于检测近期输入浓缩红细胞的病人体内是否发生溶血[5]。
根据溶血发生主要场所的不同，可相对地将溶血分为血管内溶血（例如阵发性睡眠性血红蛋白尿症）和血管外溶血（例如遗传性球形红细胞贫血）。血管内溶血发生时，大量红细胞在血循环中裂解并释放Hb，引起HP浓度降低。血管外溶血发生时，红细胞主要在肝脏和脾脏的单核巨噬细胞系统分解破坏，游离Hb从巨噬细胞中释放，同时可能有小部分红细胞在血循环中裂解，由此引起HP下降[6]。本文实验结果与以上观点一致，溶血部位不影响HP对溶血性贫血的诊断。HP作为一种急性时相反应蛋白，当溶血性贫血患者伴发急性时相反应时，由溶血引起的HP消耗的速度大于HP生成的速度。因此伴发急性时相反应不会影响HP对溶血性贫血的诊断。
RET和LDH符合剔除变量标准（P＞0.1），因此未进入logistic回归方程。RET和LDH诊断溶血性贫血的特异性较差。失血、骨髓受癌细胞浸润等疾病会引起RET升高；心肌梗死、肝炎和恶性肿瘤等疾病会引起LDH升高。
综上所述，血清HP是诊断溶血性贫血的一项敏感的检验指标。HP浓度水平在血管内和血管外溶血中都会降低，伴发急性时相反应不会影响HP的诊断，仅肝硬化等肝脏严重损伤疾病影响诊断。由于溶血性贫血发生率低，本实验观察的样本量有限，还有待加大样本量做进一步深入研究。
本文来自标记免疫分析与临床杂志
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